淋巴細胞分離液-人

更新時間：2010-12-24

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SC1077 　　100 ml 　　200 元

概述：聚蔗糖商品名為Ficoll 400，泛影葡胺是臨床使用的造影劑。二者組成的淋巴細胞分離液（Lymphocyte Separation Medium）具有低粘度、低滲透壓、無毒等特點，因而在過去幾十年里一直是分離血液單個核細胞（包括淋巴細胞和單核粒細胞）的標準操作方法。分離時將淋巴細胞分離液置試管底層，上面鋪加抗凝全血，兩者形成一個清晰的界面。室溫水平低速離心后出現幾個不同層次的液體和細胞帶。紅細胞和多核粒細胞密度大于分層液而沉積于管底。血小板和單個核細胞與分層液密度相當，在血漿層和分離液的界面形成白膜狀條帶，吸取該層細胞洗滌去除血小板得到純凈的單個核細胞。其中單核粒細胞純度~95%，淋巴細胞純度90~95%，得率約80%以上其高低與室溫有關，分離溫度低于10oC或超過25oC會降低細胞得率。

人與不同動物血中單個核細胞對細胞分離液的密度要求各不相同。我們提供兩種密度的淋巴細胞分離液：淋巴細胞分離液Lymphocyte Separation Medium （Human），用于分離人血液單個核細胞/淋巴細胞。淋巴細胞分離液Lymphocyte Separation Medium （Animal），用于分離小鼠、大鼠、豚鼠、兔、雞、貓、牛的血液單個核細胞/細胞分離液。

產品信息：
100 ml 細胞分離液-人 Lymphocyte Separation Medium （Human），目錄號SC1077，用于分離人血；
100 ml 淋巴細胞分離液-動物 Lymphocyte Separation Medium （Animal），目錄號SC1083，用于分離動物血；
均含Ficoll-400和泛影葡胺，pH8.0。高溫除菌。避光2-8 oC穩定2年。

操作方法：
1. 取新鮮血液，用肝素或枸櫞酸鈉或EDTA抗凝。或者，取血后靜置自然沉降1h，取上層血漿及交界面的細胞。
2. 用等體積PBS或0.9% NaCl稀釋血液或血漿。1:1稀釋血液可降低紅細胞的凝聚，提高淋巴細胞收獲量。
3. 取3 ml淋巴細胞分離液加入離心管管底，并升溫到室溫。
4. 用巴斯德玻璃吸管吸取6 ml稀釋后的血液樣品，或者取3 ml未抗凝全血或未稀釋血漿，延管壁緩慢鋪到淋巴細胞分離液上面，勿打亂液層界面。
5. 水平轉子離心2000 rpm/min或700g離心20 min，室溫約20 oC。存放2h以上的血液應離心30 min。
6. 離心后管底是紅細胞，中間層是分離液，zui上層是血漿。血漿層與分離液之間是一薄層較致密的白膜，含單個核細胞（包括淋巴細胞和單核粒細胞）。推薦用吸管直接插入到單個核細胞層并吸取該層，放入另一試管中。
7. 加10 ml生理鹽水稀釋分離的淋巴細胞，250g離心10 min，棄上清。重復洗滌1-2次，除去血小板和抗凝物質。zui后用PBS或合適的培養基將淋巴細胞稀釋備用。

注意事項：
1. 為保持淋巴細胞的活性，應該采血后馬上進行分離。分離的細胞層實際上是單個核細胞層，包括淋巴細胞和單核細胞。
2. 小動物如小鼠大鼠可斷頭取血，抗凝，用PBS 1:1稀釋血液增加回收率。分離時按照比例，每一份淋巴細胞分離液加兩份稀釋后的血液。如果操作無誤但離心后的界面之間不能形成單個核細胞層，可能是血液量不足，或未使用新鮮血液，或者不適于分離該種動物血液。相關信息：透析袋,細胞分離液,抗體,細胞因子,fermentas,

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