96孔板血液gDNA小量提取試劑盒實驗細則
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更新時間：2013-01-08 1630
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產品名稱 :
96孔板血液gDNA小量提取試劑盒
品牌 :
BIOMIGA
貨號 :
GD2815-01
規格 :
4*96/20*96/20*96
開始之前
請閱讀完整的手冊，以熟悉的EZgene TM 96孔的血液DNA試劑盒過程。
1。準備一個足夠的的洗脫緩沖和分裝成部分的蛋白酶K原液。存儲每個等分試樣在-20℃下，在使用前解凍。每個樣品，將要求25μL該溶液。
升 GD2815-00溶解洗脫緩沖液2.5毫升
升 GD2815-01與10 mL的洗脫緩沖液溶解
升 GD2815-02溶解50.0毫升洗脫緩沖液
2。如下，儲存在室溫下用無水乙醇稀釋DNA濃縮洗滌緩沖液。
升 GD2815-00加入160毫升（96％-100％）乙醇
升 GD2815-01加入640毫升（96％-100％）乙醇
升 GD2815-02加入乙醇，每瓶640毫升（96％-100％）
3。預熱洗脫緩沖液在65℃下
4。調整到250μL的樣品的體積。小于250μL的樣品，加入適當體積的PBS 250μL。對于大于250μL的樣品，每個樣品拆分成兩個取250μL，并使用1.2 mL圓底孔板溶解的兩口井。到96孔DNA板的各孔中裝入合并的溶胞產物。
儲存的血液樣本
沒有以前的治療的血液樣本的存儲導致產量減少的基因組DNA。的結果，血標本應作如下處理，
l對于短期存儲（一個星期），在含有EDTA抗凝管收集血液，并儲存于4°C。
l對于長期儲存，收集管中的血液中含有一種抗凝血劑，并儲存在-70°C。解凍冷凍血液樣本，在37°C，使用前輕輕攪拌。
EZgene TM 96 - 井血液DNA協議
1。免除25 μL 蛋白酶K（20 毫克/毫升），每孔1.2 mL圓底孔板的底部。每個樣品標記的位置。
2。井的內部，而不接觸輪輞與前端部（zui多6 x 10 6淋巴細胞或培養的細胞在PBS中可以通過觸摸到圓形孔深孔板的各孔中添加250μL的全 血，血清或體液各孔中使用）。
注：樣品體積小于或大于250μL，調整樣品體積250μL PBS（開始之前第4頁上的詳細信息，請參閱“）。
3。每個樣品中加入250μL緩沖液BL。避免接觸的輪輞井的提示，這可能會導致交叉污染。可選：添加5μL的核糖核酸酶A每口井每250μL 緩沖液BL。添加緩沖BL /核糖核酸酶A組合，以每口井。
4。密封圓形孔板上限（提供）*混合樣品，振蕩30秒或用力搖動板（邊到邊）。
注意：搖動機架一側到另一側。為了防止可能出現的泄漏周圍微管帽，不搖板和失望。
5。在2000 XG短暫離心收集任何樣本，帽子。
6。孵育樣品在65℃的培養箱中或烤箱10分鐘。混合孵化過程中偶爾輕輕地旋轉板。
注意：切勿劇烈振蕩的樣品超過20分鐘。
7。在2000年XG短暫離心收集任何解決方案，從帽。取出微管帽。向每孔中加入2 6 0μL 的無水乙醇（96-100％） 。
8。密封圓形孔板使用新上限（提供）。
9。將樣品混合，通過渦旋或用力搖動1分鐘的板（從一側到另一側）。在2000年XG短暫離心收集任何液體的上限。
10。將DNA板頂部的2毫升96孔收集板（提供）。馬克的96孔DNA板，以便后面識別。
11。傳輸從步驟10到96孔DNA板的各孔中的所有樣品。
12。用密封膜密封的96孔DNA板。離心在5000 XG 5-10分鐘。確保所有的樣品已通過膜的DNA板的各孔中。
13。丟棄流過的96孔收集板。刪除的粘合膜的蓋子，然后在各孔中添加400μL緩沖液KB。
14。密封板與新的密封膜，并在5000×g離心5分鐘，然后離心處理，以使板。丟棄流過的96孔收集板。
15。取出的密封膜的蓋子，然后在各孔中添加700μLDNA洗滌緩沖液。
注：即DNA洗滌緩沖液濃縮物和被提供作為瓶或第4頁上所示，必須用無水乙醇稀釋。如果是冷藏保存，稀釋的洗滌緩沖液必須冷卻至室溫后再使用。
16。密封板與新的密封膜，并在3000-5000 xg離心5分鐘，然后離心處理，以使板。丟棄的流量，通過在96孔收集板。
17。卸下粘接膜蓋和在各孔中添加600μLDNA洗滌緩沖液。將DNA的2毫升收集板的頂部板96孔，96孔DNA板密封與 ??一個新的密封膜和離心機在馬克西速度（5,000 xg離心）10分鐘。
18。取出的密封膜，并在真空烘箱中或在70℃的培養箱預置為8分鐘，干燥膜孵育96孔DNA板。
注意：這些干燥步驟用于除去的微量乙醇，否則可能會干擾與下游應用是至關重要的。
19。將96孔DNA板之上的新的安裝機架的微管（附帶）。添加200μL洗脫緩沖液在65℃下預熱96孔DNA板的各孔中。兩到四分鐘，在室溫下孵育，或在孵化器設定在65℃的一到兩分鐘。
20。與一個新的密封膜密封96孔DNA板和離心處理，以使板在5,000 xg離心5分鐘，以洗脫DNA。
注： *次洗脫通常會產生60％-70％的DNA綁定到列。另外200μL洗脫緩沖液可以產生另外的20％。 低于50μL的卷，大大降低了產量。
