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問題1.淋巴細胞分離液的溫度對于分離的影響有多大，有無做過不同室溫溫度及不同液體溫度下的分離效果驗證？

淋巴細胞分離液由于配制時的環境溫度即為20℃±2℃，保證該溫度下分離液密度為1.077±0.001g/mL，分離液的作用原理：密度梯度分離，分離成功的關鍵即為正確的密度保證。溫度和密度緊密，高溫度下，分離液低密度；低溫度下，分離液高密度，因此建議使用時，樣品和分離液的溫度均應為18℃-22℃之間。

建議： 使用時，環境、樣品及分離液的溫度控制均應在20℃±2℃

問題2.如何更好的提高血液分離效率，那些因素會導致提取效率過低？

影響因素：

ü樣本新鮮程度：*分離時間為2h以內

ü血液稀釋比例

ü所使用離心管直徑高度：分離液和樣本量在管中的高度不得超過管體積的2/3

ü分離液與樣本的比例：分離液至少得和上樣樣本體積一致，分離液越多越好

ü血液個體差異問題

ü血液及分離液都不要經過冷藏及冷凍，且使用時的溫度在18℃-22℃之間

離心力及離心時間

問題3.每個客戶的離心機不同，是否可以使用統一的離心力提取細胞?如果使用統一的離心力提取淋巴細胞效果如何？

因為血液個體差異粘稠度、采血時間、血液量等，根據不同的因素來進行調整。可以統一離心力，但需根據個體差異略有改動。  

問題4.有一些的離心機有升速降速速率調節，如何來設定升速降速速率以保證能得到數量及純度較高的PBMC（舉例）？有一些普通的離心機沒有升降速速率調節，PBMC層就就形成得不好，如何解決此類問題？

建議升速為1min，降速為3min分離效果理想。升降速時間不包含在離心時間里。

問題5.說明書上是針對骨髓、臍帶血、外周血標本，我們在使用過程中還會遇到胸腹水、心包積液等體液標本，那對這類標本的分離沒有特殊分離要求？

除血液樣本以外，其他來源樣本首先要富集樣本中的細胞，要求細胞懸液濃度控制在2×108-1×109個/ml，效果*。

問題6.有一些標本本身淋巴細胞百分比就比較低，如何盡可能的提高得率或是有無方法去除掉一些其他不要的細胞？

要選擇合適的試管、樣本要2h以內進行分離，分離液使用量要多余樣本量，以及離心力、離心時間、溫度要合適等。

根據樣本量制定的實驗方案:

建議：分離液用量1:1是指與上樣量1:1